La boîte U-Box (résidus d`acides aminés 273 – 338) a été identifiée par une recherche de modèle de Markov caché de la base de données intelligente, suivie d`un alignement des séquences avec les boîtes en U de la structure connue de la puce [code PDB 2C2V17; 18, Prp23 et AtPUB24]. Alors que ces séquences ont une identité crépusculaire avec le U-Box (10 – 14%) mais une similitude plus substantielle des séquences (41 – 48%) a été trouvé. L`alignement a été utilisé pour générer une structure de modèle pour la boîte d`U de la loi à l`aide du modèle Suisse interface16. La géométrie et la conformation globales du modèle raisonnable ont été vérifiées par un certain nombre de paramètres, y compris les Pseudo-énergies calculées par QMEAN (− 1204 kJ/mol25) et par DFIRE (− 3250 kJ/mol26). Les mesures de la qualité de la structure locale (ANOLEA et GROMOS Energies) ont appuyé ces chiffres, en particulier dans les régions centrales du pli. Le score S moyen du modèle (calculé en ProQRes27) était de 0,65, ce qui est considéré comme raisonnable étant donné les homologies relativement basses des séquences entre les structures de gabarit et la Loi. L`analyse de séquence globale et la modélisation structurelle fournissent une confiance suffisante dans le domaine U-Box de la catégorie. Nos études montrent que la molécule de la protéine avec cette hypothétique U-Box était en effet en mesure de conférer l`activité d`E3 ubiquitine ligase in vitro et in vivo. Alors que la suppression de l`U-Box a aboli l`activité E3 de la la, la boîte en U seule suffisait à médier la polyubiquitination. Les mutations ponctuelles des résidus clés dans la boîte en U (prédit par l`alignement des séquences et la modélisation structurelle avec la boîte en U connue contenant l`E3 CHIP) ont aboli son activité E3, confirmant ainsi la spécificité du domaine U-Box de la catégorie.

Ensemble, nos résultats indiquent que la boîte de conserve contient une U-Box de bonne foi avec une puissante activité d`ubiquitine ligase de l`E3. Bien que la NTA ait été identifiée comme une molécule adaptatrice essentielle dans la signalisation IL-17, il reste à définir les mécanismes précis par lesquels il médite la signalisation IL-17. Pour déchiffrer le mécanisme moléculaire par lequel la voie transduit signalisation du récepteur aux molécules de signalisation «en aval», nous avons recherché le ou les domaines effecteur de la n-b important pour les voies de signalisation induites par l`il-17. A Hidden Markov le modèle de recherche de la base de données SMART (smart.embl-heidelberg.de) à l`aide de la séquence humaine de la loi a identifié une région entre les résidus 273 – 338 comme ayant une homologie avec la classe de domaine U-Box des ligases d`ubiquitine. Cette portion de la section a été alignée sur les séquences sélectionnées de la boîte en U (Fig.